隨著全球人口的持續(xù)增加，人們對(duì)食品的需求量也在不斷上升，使開(kāi)發(fā)新的食物原料成為研究熱點(diǎn)。而我國(guó)的供給側(cè)改革對(duì)食品質(zhì)量提出了更高的要求，其目的是滿(mǎn)足消費(fèi)者對(duì)食品的更高感官屬性及營(yíng)養(yǎng)功能性。從以上兩方面來(lái)看，開(kāi)發(fā)新的食物原料并研究其加工特性勢(shì)在必行。在肉糜生產(chǎn)加工過(guò)程中為去除肉腥味以及提高肌原纖維蛋白的凝膠性質(zhì)，有時(shí)會(huì)去除肌漿蛋白，造成大量的浪費(fèi)。而畜禽肉在冷藏期間的汁液流失，也含有大量的肌漿蛋白。肌漿蛋白是肌肉中含量較高的蛋白質(zhì)，占蛋白總量的30%～35%。在肌肉組織中，肌漿蛋白是天然存在的水溶性蛋白質(zhì)并且溶于低離子強(qiáng)度的緩沖液中，主要是由肌溶蛋白、肌紅蛋白和肌酶蛋白組成。以往對(duì)于肌漿蛋白的研究多集中在其對(duì)于凝膠類(lèi)肉制品的影響上。

近年來(lái)，科研人員進(jìn)一步挖掘肌漿蛋白的功能性，發(fā)現(xiàn)肌漿蛋白作為食品原料具有潛在應(yīng)用價(jià)值，Sahin等研究了電紡魚(yú)肌漿蛋白納米纖維的制備與表征，Yongsawatdigul等研究表明含有40單元轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶活力的羅非魚(yú)肌漿蛋白能促進(jìn)其肌動(dòng)球蛋白的交聯(lián)，交聯(lián)程度隨含量的增加而增加，同時(shí)促進(jìn)肌動(dòng)球蛋白重鏈和肌鈣蛋白交聯(lián)，但對(duì)肌動(dòng)蛋白和原肌球蛋白無(wú)影響，肌漿蛋白可作為潛在的增強(qiáng)蜥蜴魚(yú)肉醬凝膠強(qiáng)度的蛋白添加劑。但針對(duì)不同種類(lèi)動(dòng)物肌漿蛋白界面性質(zhì)的深入研究十分匱乏。本實(shí)驗(yàn)對(duì)豬肉、雞肉和魚(yú)肉肌漿蛋白的油-水界面性質(zhì)進(jìn)行了研究，并探究3種蛋白的結(jié)構(gòu)不同與功能差異的相關(guān)性，以期給相關(guān)研究人員提供借鑒。

1材料與方法

1.1材料與試劑

金龍魚(yú)一級(jí)大豆油購(gòu)于南京蘇果超市。根據(jù)所占胴體的比例確定原料肉，豬肉取豬背最長(zhǎng)肌，魚(yú)肉選取魚(yú)骨較少的鯰魚(yú)，雞肉選擇雞大胸，以上3種肉均是蘇果超市出售的新鮮產(chǎn)品。

25 mmol/L的磷酸鹽緩沖液（25 mmol/L K2HPO4，25 mmol/L KH2PO4）、1-苯胺基萘-8-磺酸（8-anilino-1-naphthalenesulfonic acid，ANS）、雙縮脲、牛血清白蛋白、5,5’-二硫代雙-2-硝基苯甲酸（5,5’-dithiobis-(2-nitrobenzoic acid)，DTNB）、磺基水楊酸國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；鹽酸胍、十二烷基硫酸鈉（sodium dodecyl sulfate，SDS）阿拉丁控股集團(tuán)有限公司。

1.2儀器與設(shè)備

Avanti J-E離心機(jī)美國(guó)Beckman Coulter公司；Ultra Turrax T-25 Basic高速勻漿機(jī)、C-MAG HS7磁力攪拌器德國(guó)I K A公司；差示掃描量熱儀美國(guó)PerkinElmer股份有限公司；L-8900日立全自動(dòng)氨基酸分析儀中國(guó)天美科學(xué)儀器有限公司；多功能酶標(biāo)儀美國(guó)MD公司；Zeta電位儀美國(guó)馬爾文公司；界面流變儀法國(guó)Teclis公司；Alpha 2-4 LSC plus凍干機(jī)德國(guó)Christ公司。

1.3方法

1.3.1不同肉類(lèi)肌漿蛋白的制備

參照Liu Jiao等的方法并加以修改。將肉塊先用去離子水沖洗干凈后，用手術(shù)刀切成小塊，而后在絞肉機(jī)中絞碎，碎肉加入4倍體積25 mmol/L的磷酸鹽緩沖液（pH 7.2），再用組織破碎機(jī)在10 000 r/min勻漿10 s；勻漿液在4℃、13 000hg離心20 min，上清液用三層紗布過(guò)濾，濾液即為肌漿蛋白。

1.3.2氨基酸組成測(cè)定

吸取約8 mL肌漿蛋白樣品于離心試管中，3 000 r/min離心5 min（離心達(dá)到固液分離的目的），吸取離心后上清液1 mL，加入1 mL 2%的磺基水楊酸溶液，經(jīng)渦旋儀振蕩混勻后，靜置10 min；在4 500 r/min離心20 min，離心后的上清液過(guò)0.45μm的濾膜后裝入2 mL的液相瓶中。

設(shè)置氨基酸自動(dòng)分析儀的檢測(cè)波長(zhǎng)為440 nm和570 nm，設(shè)置反應(yīng)柱溫度35℃、流速0.400 mL/min、柱后衍生試劑流速0.350 mL/min。準(zhǔn)確吸取混合氨基酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，用pH 7.2的緩沖液稀釋到5 mL，此標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋濃度為5.00 nmol/50μL，作為上機(jī)測(cè)定用的氨基酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.3.3理化指標(biāo)測(cè)定

1.3.3.1蛋白質(zhì)溶解度

利用牛血清白蛋白作標(biāo)準(zhǔn)曲線，用雙縮脲法在540 nm波長(zhǎng)處測(cè)定蛋白質(zhì)吸光度，測(cè)定結(jié)果為每毫升溶液含蛋白質(zhì)的質(zhì)量，即mg/mL。

1.3.3.2粒徑

采用配備4 mW氦-氖激光的Zetasizer Nano ZS 90，基于動(dòng)態(tài)光散射（dynamic light scattering，DLS）原理進(jìn)行分析，將3種肌漿蛋白的質(zhì)量分?jǐn)?shù)利用25 mmol/L的磷酸鹽緩沖液稀釋到0.1%，每個(gè)樣品重復(fù)測(cè)量3次，取平均值。

1.3.3.3蛋白質(zhì)電位

方法同1.3.3.2節(jié)。

1.3.3.4表面疏水性

參照Creamer和常海霞等的方法并加以修改。利用疏水性探針結(jié)合法進(jìn)行測(cè)定，ANS作為熒光探針表征疏水性的強(qiáng)弱。將肌漿蛋白質(zhì)量濃度稀釋到1 mg/mL，并取4 mL至離心管，再加入20μL 15 mmol/L的ANS（pH 7.0）溶液，利用渦旋振動(dòng)儀充分振蕩，在25℃（避光）靜置20 min，再將樣品滴入黑色96孔板中，設(shè)置酶標(biāo)儀的激發(fā)波長(zhǎng)375 nm，發(fā)射波長(zhǎng)410～570 nm，測(cè)定其熒光強(qiáng)度。